蓝耳病灭活疫苗的认识及科学使用

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），又称猪蓝耳病，可造成母猪产死胎、木乃伊胎、弱仔、早产等繁殖障碍，保育猪严重的呼吸道症状，容易继发副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病等细菌病，对养猪业造成巨大损失。疫苗免疫是预防PRRS的重要措施，临床应用的蓝耳病疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗。目前对蓝耳病灭活疫苗的认知和评价褒贬不一，优质的蓝耳病灭活疫苗应该具有哪些特点呢？本文就蓝耳病灭活疫苗的认知、优质蓝耳病灭活疫苗具备的特点、免疫方案等内容进行介绍。

1 目前对蓝耳病灭活疫苗的认知

PRRSV灭活疫苗具有安全、储存方便等优点，对母体抗体的干扰相对较弱（Charoenchanikran P et al.,2016）。蓝耳病灭活疫苗能够显著降低母猪死胎数和流产率，显著提高母猪繁殖力和仔猪存活率（Kim H et al.,2011）；缩短公猪精液中PRRSV持续存在的时间（Opriessnig T et al.,2002）；母猪在妊娠第8周免疫蓝耳病弱毒疫苗，分娩前3周免疫蓝耳病灭活疫苗，可有效降低PRRS的发生率（Martin-Valls G E et al.,2022）；蓝耳病弱毒疫苗与蓝耳病灭活疫苗联合使用，可以缩短仔猪病毒血症时间、减少病理性损伤、提高日增重（Kick A R et al.,2021）。

蓝耳病灭活疫苗也存在许多不足，对异源毒株只提供部分交叉保护、免疫剂量大、免疫次数多、不能诱导产生细胞免疫、产生的中和抗体水平低、存在抗体依赖性增强效应（ADE）等。公猪用异源毒株蓝耳病灭活疫苗免疫，不能降低精液中的PRRSV载量（Nilubol D et al.,2004）；不能诱导可检测到的中和抗体和细胞免疫（Piras F et al.,2005；Bassaganya-Riera J et al.,2004）；对PRRSV特异性抗体低的猪免疫蓝耳病灭活疫苗会诱导ADE，增加PRRS的严重程度和猪对PRRSV的易感性（Christianson W T et al.,1993；Yoon K J et al.,1996）。如何解决蓝耳病灭活疫苗存在的这些问题，对蓝耳病灭活疫苗的毒株、灭活方法、佐剂、抗原含量及正确应用提出了更高的要求。

2 优质蓝耳病灭活疫苗具备的特点

2.1 毒株同源性

蓝耳病灭活疫苗毒株与野毒同源性的高低对蓝耳病灭活疫苗的免疫效果非常关键。为了验证蓝耳病灭活苗毒株同源性与疫苗保护效果的关系，Marc F Geldhof等将猪场分离的PRRSV毒株07V063和异源毒株LV分别用BEI灭活制备蓝耳病灭活疫苗，另外选取一种商业蓝耳病灭活疫苗和两种商业蓝耳病弱毒疫苗，用07V063攻毒，通过病毒血症和特异性中和抗体滴度评价各个疫苗免疫效果（Marc F Geldhof et al.,2012）。

与对照组相比，蓝耳病灭活疫苗（07V063）可以缩短病毒血症2周，商业蓝耳病弱毒疫苗可以缩短病毒血症1周，蓝耳病灭活疫苗（LV）对病毒血症时间没有影响；蓝耳病灭活疫苗（07V063）和蓝耳病灭活疫苗（LV）都能诱导07V063特异性中和抗体，商业蓝耳病灭活疫苗和蓝耳病弱毒疫苗不能诱导产生特异性中和抗体。结果证实，蓝耳病灭活疫苗毒株与野毒同源性高对疫苗的免疫效果非常重要，能够显著缩短病毒血症、提高中和抗体滴度（Marc F Geldhof et al.,2012）。

目前L1谱系的类NADC30、类NADC34毒株 PRRSV已经成为我国猪场的优势毒株，制备蓝耳病灭活疫苗需要与L1谱系同源性高的抗原。

2.2 最优的灭活方法和高抗原含量

灭活疫苗主要通过产生中和抗体发挥作用，先进的灭活工艺能够起到很好的裂解效果，充分暴露PRRSV的抗原表位，疫苗免疫原性更好，产生的中和抗体水平更高；另外，高抗原含量的蓝耳病灭活疫苗产生的中和抗体滴度更高。

Hyunil Kim等对蓝耳病灭活苗的灭活方法和抗原含量对疫苗效果的影响做过论证，用二乙烯亚胺（BEI）、β-丙内酯、福尔马林三种灭活方法制备蓝耳病灭活疫苗，通过中和抗体滴度（VN） 比较三种疫苗的免疫效果；比较不同抗原含量的蓝耳病灭活疫苗（BEI灭活）产生的中和抗体滴度。试验结果：攻毒后22天，与福尔马林组和β-丙内酯组相比，BEI灭活组产生更高水平的中和抗体（图1）；用BEI灭活，与10⁴PFU/ml、10⁵PFU/ml组相比，10⁶PFU/ml组能产生更高水平的VN（图2）（Hyunil Kim et al.,2011）。结果表明，BEI灭活效果最好，产生的中和抗体水平最高；抗原含量越高，产生的中和抗体水平更高。

图1  不同灭活处理组，免疫攻毒后22天，中和抗体检测结果（BEI灭活组中和抗体水平更高）

图2 不同抗原含量组，免疫攻毒后22天PRRSV中和抗体检测结果（含量高，中和抗体更高）

另有学者证实，用BEI灭活的蓝耳病灭活疫苗能够产生高水平的中和抗体。用紫外（UV）或二乙烯亚胺（BEI）灭活后，用两种不同的油佐剂（弗式不完全佐剂或 Suvaxyn 水/油佐剂）进行静脉注射，用同源毒株攻毒，中和抗体可增强3-5log2，病毒血症降低2log2； 怀孕母猪免疫3次 BEI灭活的蓝耳病灭活疫苗，用同源毒株攻毒，中和抗体增加到5log2，病毒血症降低（Vanhee M et al.,2009）。

2.3 优质的佐剂

优质的佐剂能够增强蓝耳病灭活疫苗的免疫原性和有效性。Sandra Vreman等比较了不同佐剂蓝耳病灭活疫苗的免疫效果，用O/W佐剂（ISA28）、角鲨烯水乳剂（SWE）、角鲨烯水乳剂（SWE）+toll样受体激动剂（TLRa）蓝耳病灭活疫苗肌肉注射，PRRSV阴性仔猪在3日龄和30日龄两次免疫。结果表明，不同佐剂组产生的细胞免疫水平和中和抗体滴度差异较大，加强免疫后ISA28组产生中和抗体，其他佐剂组不能；SWE组能够产生特异性T细胞IFN-γ反应，ISA28组产生的细胞免疫反应较低，其他组不诱导产生细胞免疫反应。结果证实，佐剂对蓝耳病灭活疫苗诱导产生的体液免疫和细胞免疫影响较大，应该选用优质的佐剂（Sandra Vreman et al.,2011）。另有报道，GP5蛋白去糖基化的PRRSV2经BEI灭活，添加Montanide佐剂，疫苗免疫2次，再用同源毒株攻毒，疫苗免疫猪肺损伤减轻、病毒载量降低，同时诱导产生4log2的中和抗体（Lee J A et al.,2014）。

大量的研究证实，蓝耳病灭活疫苗需要优质的佐剂才能产生保护水平的中和抗体，才能降低病毒血症、减轻病理损伤，起到好的保护作用。

3 免疫程序对效果的影响

免疫蓝耳病疫苗是防控蓝耳病的重要环节，需要制定科学的免疫程序。大量的临床实践证明，采用蓝耳病弱毒疫苗和蓝耳病灭活疫苗组合免疫，免疫效果最好。

I. Díaz等对蓝耳疫苗“活+灭”组合免疫的效果做过验证。试验1（E1）：21头仔猪，分为3组，A组在2.5月龄、3.5月龄、6.5月龄免疫3次蓝耳病灭活疫苗（INV），B组在1.5月龄、2.5月龄、5.5月龄、6.5月龄免疫4次蓝耳病灭活疫苗，C组为空白对照组，7.5月龄用PRRSV攻毒，持续21d；试验2（E2）：32头仔猪，分为4组，A组1.5月龄免疫蓝耳病弱毒疫苗（MLV）、4.5月龄免疫INV，B组1.5月龄免疫MLV、4.5月龄免疫MLV，C组1.5月龄免疫MLV、4.5月龄免疫INV、5.5月龄免疫INV，D组为空白对照组，6.5月龄用PRRSV攻毒，持续21d（I. Díaz et al.,2013）。

试验1比较免疫次数对蓝耳病灭活疫苗免疫效果的影响，加强免疫一次蓝耳病灭活疫苗能诱导高水平的细胞免疫（IFN-γ）；加强免疫蓝耳病灭活疫苗，用PRRSV攻毒后，中和抗体（NA）升高明显，母猪免疫蓝耳病灭活疫苗后感染野毒也会出现这样的免疫反应。加强免疫蓝耳病灭活苗能够提高细胞免疫效果（IFN-γ），猪只感染野毒后，产生更高水平的中和抗体。

试验2比较不同的蓝耳病灭活疫苗与蓝耳病弱毒疫苗免疫组合的免疫效果。在中和抗体水平方面，采用“活+灭”和“活+灭+灭”产生的中和抗体水平差异不显著，但都比“活+活”组产生的中和抗体高，攻毒后“活+灭+灭”组产生的中和抗体水平更高；在细胞免疫方面，“活+灭+灭”组产生的IFN-γ比“活+活”组和“活+灭”组高。蓝耳病疫苗“活+灭+灭”是最佳免疫方案。

    因此，从实际免疫效果分析，蓝耳病疫苗“活+灭+灭”免疫效果更佳，能够产生更高水平的中和抗体和细胞免疫水平。在生产实践中，如果猪群已经感染PRRSV或免疫过蓝耳病弱毒疫苗，可以只免疫蓝耳病灭活疫苗；蓝耳病灭活疫苗需要较高的免疫频率。

4 华蓝泰的特点及免疫方案

4.1 华蓝泰的特点

4.1.1 新型抗原

采用先进抗原裂解技术，充分暴露中和位点，使其抗原性更强，能够产生更高的中和抗体。

4.1.2 抗原含量高

采用悬浮培养高滴度生产病毒抗原，抗原含量≥10^8.3TCID₅₀/mL以上。

4.1.3 抗原纯净

多级纯化工艺，抗原纯度达95%以上。

4.1.4 新型佐剂

采用新型佐剂配苗，在激发强大体液免疫的同时，刺激机体产生一定的细胞免疫，提高了疫苗的保护效果。

4.1.5 保护效果好

攻毒保护试验表明，免疫组显著降低血液和组织中的病毒载量，缩短排毒时间，病理损伤不明显。对蓝耳病临床流行毒株（类HP-PRRS、NADC30、NADC34等）均可很好保护。

4.1.6 联免升级

华蓝泰配合蓝经灵（蓝耳病活疫苗），效果更佳；此外，可和华派生物生产的圆环康、支肺通、圆支泰联合免疫。

4.2 华蓝泰的免疫方案

根据猪场蓝耳病感染状态和猪场生物安全水平，实施科学免疫。

4.2.1 蓝耳病阳性活跃场（抗原阳性、抗体阳性）

经产母猪：采取“1414”方案。先用药物保健1周，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）；间隔7天再用药物保健1周，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）+蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰）；蓝耳稳定后的免疫按照蓝耳病稳定场执行。

仔猪：根据发病日龄确定免疫时间。7-14日龄，免疫蓝耳病弱毒疫苗0.5-1头份（蓝经灵）；间隔2周，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）+蓝耳病灭活疫苗1mL（华蓝泰）。

后备母猪：暂停引种，本场已留用后备母猪加强健康管理和引种驯化。药物保健7-10天，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）+蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰），2-3周后，以相同剂量加强免疫一次。

4.2.2 阳性稳定场（抗原阴性、抗体阳性）

根据风险评估确定免疫方案。

经产母猪：采取“1441”方案。产后14天，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）；配种后40-50天，免疫蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰）。或每3个月免疫一次，采用“活、灭、活、灭”交替免疫。

仔猪：14-21日龄免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵），2周后免疫蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰）；或“活+灭”左右两侧分边注射。

后备母猪：120日龄，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵），间隔3-4周，免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）+蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰）。

4.2.3 阴性场（抗原阴性、抗体阴性）

根据风险评估确定是否免疫。推荐母猪免疫蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰），4次/年；仔猪离场免疫蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）或“蓝耳病弱毒疫苗1头份（蓝经灵）+蓝耳病灭活疫苗1mL（华蓝泰）”左右两边注射；引进双阴后备母猪，配种前两次免疫蓝耳病灭活疫苗2mL（华蓝泰），间隔3-4周。